Baňky nebo vícevrstvé lahvičky pro buněčné kultury
Jsou ideálním řešením pro zvýšený růst různých primárních a transformovaných buněk v kulturách bez séra nebo obsahujících sérum, inovativní laboratorní nástroj, který nabízí větší buněčný povrch a výtěžek ve srovnání s tradičními jednovrstvými lahvemi.
Jaký je v takových situacích postup přípravy podkladu? vícevrstvé lahve? Zkušenosti:
Buněčná kultura ve vícevrstvých lahvích
1. Smíchejte buněčnou suspenzi s médiem: Připravte buněčnou suspenzi o požadované koncentraci v nádobě. Doporučený objem je přibližně 30-50 ml na vrstvu.
2. Pomocí sérologických pipet pomalu přidejte smíchanou kapalinu do vícevrstvé lahvičky. Abyste zabránili tvorbě pěny a bublin, nechte proud kapaliny proudit podél sklonu vícevrstvé baňky (pokaždé ponechejte v pipetě malé množství kapaliny): 10ml pipeta umožňuje dávkovat médium na dno plavidlo.
3. Držte vícevrstvou baňku ve svislé poloze s logem směrem k vám a nakloňte ji ve směru hodinových ručiček do úhlu 45° na rovné pracovní ploše, aby se kapalina rovnoměrně rozdělila do každé vrstvy.
4. Podržte sendvičovou baňku pod úhlem 45° a opatrně ji položte naplocho na pracovní plochu logem nahoru.
5. Po umístění vícevrstvé baňky naplocho na pracovní povrch jemně kývejte dopředu a dozadu a ze strany na stranu, aby se buňky rovnoměrně rozmístily na kultivačních površích.
6. Rychle a opatrně umístěte baňku do inkubátoru. Tipy: Dávejte pozor, aby médium nezpěnilo a nevylilo tekutinu z každé vrstvy.
Vyjmutí kultivačního média z vícevrstvé láhve
Substrát můžete odsát nebo vylít vícevrstvá baňka.
Metoda aspirace: Chcete-li médium odsát nebo odebrat, držte vícevrstvou baňku svisle s logem NEST směrem k vám a nakloňte ji proti směru hodinových ručiček do úhlu 45°. Poté vytáhněte pipetu dolů, abyste nasávali médium, dokud není zcela nasáto.
Způsob nalévání: Držte vícevrstvou baňku svisle s logem směrem k vám, nakloňte ji proti směru hodinových ručiček do úhlu 45° a vylijte použité médium z vícevrstvé baňky. Tipy: Při nasávání média se doporučuje použít aspirační pipetu Googlab 10 ml, aby bylo možné médium zcela nasát.
Viz také další laboratorní vybavení od společnosti Genoplast.
Sběr buněk
1. Jednou opláchněte pufrem a přidejte disociační činidlo (≥5 ml na vrstvu). Poté postupujte podle kroků 3-5 a rozetřete disociační činidlo na každou vrstvu.
2. Neutralizujte inaktivačním roztokem a promíchejte podle kroků 3-5. Jemným kroužením zcela odstraňte buňky.
3. Postupujte podle protokolu „Aspirační metoda“ a odeberte buněčnou suspenzi pomocí 10ml sérologické pipety Googlab.
4. Postupujte podle „Metody lití“. Nalijte buněčnou suspenzi do kónické zkumavky NEST.
5. V případě potřeby opláchněte dalším promývacím pufrem.